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Bis-Tris蛋白預(yù)制膠使用方法

更新時間:2025-02-14      點擊次數(shù):383
  Bis-Tris蛋白預(yù)制膠的使用方法通常包括以下幾個步驟,這些步驟可能會因不同的品牌和型號而略有差異,但總體流程大致相同:
 
  一、準(zhǔn)備工作
 
  選擇合適的預(yù)制膠:根據(jù)實驗需求,選擇適當(dāng)?shù)腂is-Tris蛋白預(yù)制膠濃度和規(guī)格。
 
  取出預(yù)制膠:從包裝袋中取出預(yù)制膠,并撕去底部的密封膠帶(通常為藍色或透明色)。
 
  固定預(yù)制膠:將預(yù)制膠固定在電泳槽中,確保膠板與電泳槽的接觸面平整,且密封良好以防止漏液。
 
  二、電泳緩沖液準(zhǔn)備
 
  準(zhǔn)備電泳緩沖液:根據(jù)預(yù)制膠的說明,準(zhǔn)備適量的電泳緩沖液。通常,Bis-Tris蛋白預(yù)制膠使用的是MOPS或MES緩沖系統(tǒng),而非Tris-Glycine等其他電泳緩沖液。
 
  加入電泳緩沖液:向內(nèi)槽中加入足夠的電泳緩沖液,確保浸沒點樣孔;外槽中的電泳緩沖液應(yīng)至少沒過電泳槽底部的陽極,但不可漫過膠板。
 
  三、上樣
 
  處理樣品:將蛋白樣品與Loading buffer按比例混合均勻,并根據(jù)需要進行加熱處理(如使蛋白變性)。
 
  加樣:使用移液器將處理好的蛋白樣品加入預(yù)制膠的加樣孔中,注意避免槍頭戳破凝膠或過度插入梳孔造成漏液。同時,注意每個加樣孔的容量限制,以避免溢出。
 
  四、電泳
 
  設(shè)置電泳條件:根據(jù)預(yù)制膠的說明或?qū)嶒炐枨螅O(shè)置合適的電泳電壓和時間。通常,Bis-Tris蛋白預(yù)制膠的電泳條件為100150V,電泳時間4060分鐘。
 
  啟動電泳:將電泳槽插上電源線,并將電源線插頭插入電泳儀電源插孔。然后,選擇合適的電泳條件并啟動電泳儀。
 
  觀察電泳過程:在電泳過程中,可以觀察溴酚藍指示帶的移動情況,以判斷電泳的進度和是否需要調(diào)整電泳條件。
 
  五、凝膠取出與后續(xù)處理
 
  電泳結(jié)束:當(dāng)溴酚藍指示帶電泳至膠板底部或?qū)嶒烆A(yù)定位置時,結(jié)束電泳。
 
  取出凝膠:關(guān)閉電泳儀并斷開電源后,從電泳槽中取出預(yù)制膠。使用撬具或刀片小心插入膠板之間的空隙,撬動膠板上、中、下三個位置,直至膠板完全分離。
 
  凝膠處理:將有凝膠的膠板一側(cè)浸入水中(通常為蒸餾水),貼著水面輕輕提起膠板,使凝膠從膠板上脫落。然后,將凝膠取出進行后續(xù)實驗,如染色、成像等。
 
  六、注意事項
 
  安全操作:實驗過程中應(yīng)穿實驗服并戴一次性手套操作,確保個人安全。
 
  避免污染:在操作過程中,避免電泳緩沖液、樣品等化學(xué)物質(zhì)濺入眼睛或皮膚;同時,也要防止這些物質(zhì)污染實驗器材和凝膠。
 
  電泳條件調(diào)整:根據(jù)實驗需求和預(yù)制膠的說明,可以適當(dāng)調(diào)整電泳電壓和時間以獲得最佳實驗結(jié)果。
 
  凝膠保存:如果凝膠需要保存以備后續(xù)使用,應(yīng)將其浸泡在適當(dāng)?shù)谋4嬉褐校Υ嬖诘蜏貤l件下(如4℃)。
 
  遵循以上步驟和注意事項,可以確保Bis-Tris蛋白預(yù)制膠的正確使用和實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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